Получение малых однослойных липосом методом экструзии
Озвучивание проводили с использованием ультразвукового дезинтегратора («type UD-20», TECHPAN, Польша). Суспензию мультиламелярных везикул помещали в толстостенный стеклянный стакан. Наконечник излучателя погружали непосредственно в суспензию и проводили «озвучивание» в течение 4-5 мин. Осаждали сохранившиеся мультиламелярные везикулы методом центрифугирования в рефрижераторной центрифуге 10000 g в течение 15 мин. Размер липосом контролировали по спектру мутности [4].
Получение малых однослойных липосом методом ультразвуковой сонификации
В колбу ротационного испарителя ИР-1М2 помещали раствор липидов, приготовленный на перегнанном хлороформе. Раствор упаривали в вакууме при температуре 55°С. После чего заливали буферный раствор (0,1 М трис-HCl, рН 7,4) либо раствор, содержащий соответствующее действующее вещество. Колбу интенсивно встряхивали в присутствии стеклянных шариков.
Получение мультиламелярных везикул
температура хранения
«α-ТФ липосомы»
«стандартные липосомы»
Способ получения липосом
Таблица 1 Дизайн эксперимента и обозначение групп
Для приготовления липосом использовали фосфатидилхолин и холестерин в молярном соотношении 7:5 соответственно («стандартные» липосомы). В качестве антиоксидантного фактора использовали α-токоферол. Для приготовления липосом с α-токоферолом («α-ТФ» липосомы) соотношение фосфатидилхолин: холестерин: α-токоферол составило 6:3:1. Липосомы готовили методом экструзии («экструдерные липосомы») и методом ультразвуковой сонификации («ультразвуковые липосомы»). Весь материал разделили на четыре группы (табл. 1): «стандартные» экструдерные липосомы (I группа); «стандартные» ультразвуковые липосомы (II группа); «α-ТФ» экструдерные липосомы (III группа); «α-ТФ» ультразвуковые липосомы (IV группа). Хранили липосомы при температуре 4 и 25°С. В каждой группе определяли содержание диеновых и триеновых коньюгатов, малонового диальдегида. Детекцию продуктов ПОЛ проводили через 3, 24, 48 и 72 часа.
Материалы и методы исследования
В настоящем исследовании изучали влияние α-токоферола, включенного в липидную фазу, на динамику процессов липопероксидации в мембранах липосом, полученных методами экструзии и ультразвуковой сонификации, хранившихся при температуре 4 и 25°С.
Наиболее распространенным и перспективным направлением использования везикулярных мембранных систем в биологии и медицине является создание липосомальных форм лекарственных препаратов [6, 7]. Однако широкому их применению препятствуют проблемы изменения физико-химических свойств мембран липосом при воздействии внешних факторов, таких как температура и время хранения, способ получения липосом. Очевидно, что одной из основных причин повреждения липосомальной мембраны является активация перекисного окисления липидов [8]. И поскольку наличие продуктов липопероксидации является определяющим в развитии повреждения мембраны и оказывает существенное влияние на их структуру и биологические свойства, то закономерно возникает вопрос о необходимости их стандартизации по содержанию продуктов перекиного окисления липидов (ПОЛ) и целесообразности включения антиоксидантных факторов в липидную фазу липосом.
1. НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН, Кемерово
Мухамадияров Р.А. 1, Веремеев А.В. 1, Марцияш Н.Е. 1, Зинчук В.Г. 1
ВЛИЯНИЕ Α-ТОКОФЕРОЛА НА ДИНАМИКУ ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ В ЛИПОСОМАХ, ПОЛУЧЕННЫХ МЕТОДАМИ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ СОНИФИКАЦИИ И ЭКСТРУЗИИ, ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ТЕМПЕРАТУРАХ ХРАНЕНИЯ
Биологические науки
Выбрать язык: RUS
ВЛИЯНИЕ Α-ТОКОФЕРОЛА НА ДИНАМИКУ ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ В ЛИПОСОМАХ, ПОЛУЧЕННЫХ МЕТОДАМИ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ СОНИФИКАЦИИ И ЭКСТРУЗИИ, ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ТЕМПЕРАТУРАХ ХРАНЕНИЯ - Биологические науки - Фундаментальные исследования
Комментариев нет:
Отправить комментарий